DE10117205A1

DE10117205A1 - Device for preparing cells for cryopreservation

Info

Publication number: DE10117205A1
Application number: DE2001117205
Authority: DE
Inventors: Martin Winkemann
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2001-04-06
Filing date: 2001-04-06
Publication date: 2002-10-17
Also published as: WO2002080670A1

Abstract

The invention relates to a device for preparing peripheral blood stem cells for cryopreservation. Said device constitutes a closed sterile system which can be presented in the form of a flexible tube set which comprises various film bags and is designed for a single use. The inventive device enables stem cells to be prepared according to a standardised method, reducing the risk of error and bacterial contamination. The cell transplant taken from the blood is collected in a receiving container (1). At least one additional solution is added to the cell transplant, from at least one bag. The mixture of transplant and additional solution is then transferred into at least one storage bag (13, 14).

Description

Die Erfindung betrifft eine Vorrichtung zur Vorbereitung von Zellen, insbesondere Stammzellen für die Kryokonservierung und die Verwendung derselben.The invention relates to a device for preparing Cells, especially stem cells for cryopreservation and the use of the same.

Das Tiefgefrieren von lebender Zellsubstanz wird im allgemeinen als Kryokonservierung bezeichnet. Die Kryokonservierung beispielsweise von Blutbestandteilen ist allgemein bekannt.The freezing of living cell matter is generally called cryopreservation. Cryopreservation for example of blood components is generally known.

Für spezielle Therapieverfahren in der Medizin werden periphere Blutstammzellen benötigt, die dem Blut von Patienten oder gesunden Spendern mit Hilfe eines Zellseparators entnommen werden. Nach der Entnahme müssen die Stammzellen im Labor für die Kryokonservierung vorbereitet werden.For special therapy procedures in medicine become peripheral Blood stem cells needed to match the blood of patients or healthy donors with the help of a cell separator become. After removal, the stem cells must be in the laboratory for the Cryopreservation should be prepared.

Als räumliche Voraussetzung für die Kryokonservierung sind z. B. eine sterile Werkbank innerhalb eines Reinraums erforderlich. Zur Vorbereitung der Zellen für die Kryokonservierung ist es erforderlich, das Volumen des Transplantats zu ermitteln und eine vorher aus mehreren Lösungen hergestellte Gefrierschutzlösung zuzumischen, sowie entsprechende Proben des Transplantats für die Laboruntersuchungen zu entnehmen. Hierzu muss das Transplantat von Hand mittels Spritzen und Schlauchleitungen mehrfach umgefüllt werden. Die Vorbereitung der Zellen für die Kryokonservierung wird meist durch entsprechend ausgebildete medizinisch-technische Assistenten durchgeführt.As a spatial requirement for cryopreservation, e.g. B. a sterile workbench is required within a clean room. to It is preparing the cells for cryopreservation required to determine the volume of the graft and a Antifreeze solution previously prepared from several solutions to mix, as well as appropriate samples of the graft for the Laboratory examinations. To do this, the graft by hand using syringes and hose lines several times be decanted. The preparation of the cells for the Cryopreservation is usually done by appropriately trained medical-technical assistants carried out.

Die Stammzellentransplantation ist zur Zeit ein gängiges Verfahren in der Therapie bestimmter bösartiger Erkrankungen. Sie wird an größeren hämatoonkologischen Zentren inzwischen als Routineverfahren durchgeführt.Stem cell transplantation is currently a common practice Procedures in the therapy of certain malignant diseases. she is now used in larger hemato-oncological centers as Routine procedures performed.

Die Bereitstellung von Reinräumen in den Transplantationszentren setzt hohe Investitionen voraus, zusätzlich zu der sehr aufwendigen Unterhaltung. Da die Vorbereitung der Stammzellen nicht standardisiert ist, besteht das Risiko des Auftretens von Fehlern beim Mischen der Flüssigkeiten oder bakterieller Kontaminationen. Diese können für die Patienten erhebliche Konsequenzen haben. Ferner ist die Vorbereitung der Stammzellen für die Kryokonservierung relativ Zeit- und kostenintensiv.The provision of clean rooms in the transplant centers requires high investments, in addition to the very elaborate entertainment. Because the preparation of stem cells is not standardized, there is a risk of occurrence of Errors when mixing the liquids or bacterial Contamination. These can be significant for the patient To have consequences. Furthermore, the preparation of the stem cells relatively time-consuming and costly for cryopreservation.

In einem Artikel von M. Körbling, T. M. Fliedner, E. Rüber und H. Pflieger, Transfusion May-June 1980, Volume 20, No. 3, S. 293 ff wird eine Anordnung beschrieben, die einen Stammzellenbeutel, einen Beutel zur Aufnahme eines Kryoprotektivums (DMSO) und einen Lagerbeutel umfasst. Die Beutel sind über Schlauchleitungen miteinander verbunden, so dass die Gefrierschutzlösung in den Stammzellenbeutel und die Mischung aus Stammzellenkonzentrat und Gefrierschutzlösung in den Lagerbeutel überführt werden können. In an article by M. Körbling, TM Fliedner, E. Rüber and H. Pflieger, Transfusion May-June 1980 , Volume 20 , No. 3, p. 293 ff, an arrangement is described which comprises a stem cell bag, a bag for receiving a cryoprotective agent (DMSO) and a storage bag. The bags are connected to one another via hose lines, so that the anti-freeze solution can be transferred to the stem cell bag and the mixture of stem cell concentrate and anti-freeze solution can be transferred to the storage bag.

Das Mischen und Abfüllen des Transplantats muss von Hand durchgeführt werden.Mixing and filling the graft must be done by hand be performed.

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, eine Vorrichtung zu schaffen, durch die das Kontaminationsrisiko bei der Vorbereitung von Zellen für die Kryokonservierung verringert ist. Ferner ist es Aufgabe der Erfindung, die Prozesssicherheit zu erhöhen.The invention has for its object a device create by which the contamination risk in the preparation of cells for cryopreservation is reduced. Further is it is the object of the invention to increase process reliability.

Die Lösung dieser Aufgabe erfolgt erfindungsgemäß mit den im Patentanspruch 1 angegebenen Merkmalen.This object is achieved with the im Claim 1 specified features.

Die erfindungsgemäße Vorrichtung zur Vorbereitung von Zellen, insbesondere Stammzellen für die Kryokonservierung, weist ein Aufnahmebehältnis zur Aufnahme von Zelltransplantat, insbesondere Stammzelltransplantat, auf. Das Aufnahmebehältnis kann unmittelbar mit einem Zellseparator oder einer anderen geeigneten Vorrichtung verbunden werden.The device according to the invention for the preparation of cells, in particular, has stem cells for cryopreservation Receiving container for receiving cell transplant, in particular Stem cell transplant. The receptacle can immediately with a cell separator or another suitable one Device to be connected.

Ferner weist die erfindungsgemäße Vorrichtung Mittel zur Bereitstellung mindestens einer mit dem Zelltransplantat zu mischenden Zusatzlösung auf. Hierbei kann es sich um eine bei der Kryokonservierung allgemein gebräuchliche Gefrierschutzlösung und/oder eine Waschlösung handeln. Ferner ist mindestens ein Lagerbehältnis zur Aufnahme der zu konservierenden Mischung von Zelltransplantat und Zusatzlösung vorgesehen. Die in das Lagerbehältnis abgefüllte Mischung wird sodann zur Konservierung tiefgefroren, vorzugsweise schockgefroren. Vorzugsweise sind mindestens zwei Lagerbehältnisse vorgesehen. Durch das Vorsehen mehrerer Lagerbehältnisse ist sichergestellt, dass bei Beschädigung oder Kontaminierung eines Lagerbehältnisses dennoch eine ausreichende Anzahl an Zelltransplantat, insbesondere Stammzelltransplantat, vorhanden ist. Furthermore, the device according to the invention has means for Provide at least one with the cell graft mixing additional solution. This can be one of the Cryopreservation common antifreeze solution and / or a washing solution. Furthermore, at least one Storage container for the mixture of Cell graft and additional solution provided. The in that The mixture filled in the storage container is then used for preservation deep-frozen, preferably snap-frozen. Are preferred at least two storage containers are provided. By providing several storage containers ensures that at Damage or contamination of a storage container nevertheless a sufficient number of cell grafts, in particular Stem cell transplant, is present.

Ferner weist die erfindungsgemäße Vorrichtung Fluidelemente zur Flüssigkeitsverbindung zwischen dem Aufnahmebehältnis, den Mitteln zur Bereitstellung von Zusatzflüssigkeit und dem Lagerbehältnis auf. Hierdurch ist ein in sich geschlossenes steriles an einen Zellseparator oder dgl. anschließbares System ausgebildet.Furthermore, the device according to the invention has fluid elements Liquid connection between the receptacle, the Means for providing additional liquid and the Storage container. This is a closed one sterile system connectable to a cell separator or the like educated.

Die erfindungsgemäße Vorrichtung stellt somit ein einfach zu handhabendes System dar, mit dem Zellen, insbesondere Stammzellen, in einem standardisierten Verfahren für die Kryokonservierung zusammen mit einem Zellseparator vorbereitet werden können. Die Vorbereitung der Zellen kann je nach Ausbaustufe der Vorrichtung grundsätzlich mit nur wenigen manuellen Eingriffen oder auch vollautomatisch erfolgen.The device according to the invention is therefore easy to deliver handling system with which cells, in particular Stem cells, in a standardized procedure for the Cryopreservation prepared together with a cell separator can be. The preparation of the cells can depend on Expansion stage of the device basically with only a few manual intervention or fully automatic.

In dem Aufnahmebehältnis wird das dem Blut von Patienten oder gesunden Spendern mit Hilfe eines Zellseparators entnommene Zellentransplantat gesammelt. Das Zellenkonzentrat wird vorzugsweise aus dem Zellseparator direkt in das Aufnahmebehältnis überführt. Der Anschluss des Zellseparators erfolgt mit einer Anschlussleitung, die in das Aufnahmebehältnis führt.In the receptacle, this is the patient's blood or healthy donors with the help of a cell separator Cell graft collected. The cell concentrate will preferably from the cell separator directly into the Receiving container transferred. The connection of the cell separator takes place with a connection line that goes into the receptacle leads.

Da die Vorrichtung den Ablauf der einzelnen Verfahrensschritte vorgibt, ist das Verfahren zur Aufbereitung der Stammzellen standardisiert. Das Risiko des Auftretens von Fehlern wird somit minimiert. Auch können die einzelnen Verfahrensschritte für die Kryokonservierung in relativ kurzer Zeit und ohne Transport des Transplantats durchgeführt werden.Since the device the sequence of the individual process steps specifies the procedure for the preparation of the stem cells standardized. The risk of errors occurring is thus reduced minimized. The individual process steps for the Cryopreservation in a relatively short time and without transport of the Transplant.

Als in sich geschlossenes System ist die Kontaminationsgefahr erheblich verringert bzw. vollständig ausgeschlossen. Ferner macht die Vorrichtung die Bereitstellung von Reinraumbedingungen überflüssig, wodurch erhebliche Kosten eingespart werden können.As a self-contained system, there is a risk of contamination significantly reduced or completely excluded. Further the device makes the provision of clean room conditions superfluous, which can save considerable costs.

Die Vorrichtung kann prinzipiell auch mehrere Aufnahmebehältnisse umfassen, die miteinander verbunden sind. Dadurch ist ein Abzentrifugieren der für die Transplantation vorgesehenen Zellen und eine Verringerung des Volumens möglich.In principle, the device can also have several receptacles include, which are interconnected. This is a Centrifuge the cells intended for transplantation and a reduction in volume possible.

Vorzugsweise ist ein erstes Fluidelement mit dem Aufnahmebehältnis und den Mitteln zur Bereitstellung der Zusatzflüssigkeit verbunden. Ein zweites Fluidelement ist mit dem ersten Fluidelement in Form einer Abzweigung und mit dem Lagerbehältnis verbunden. Es ist somit möglich, durch das erste Fluidelement dem Aufnahmebehältnis Zusatzlösung zuzuführen. Für das zweite Fluidelement ist es in Verbindung mit dem Teilstück des ersten Fluidelements, das zwischen dem Aufnahmebehältnis und der Abzweigung angeordnet ist, möglich, Flüssigkeit aus dem Aufnahmebehältnis dem Lagerbehältnis zuzuführen. Dies hat den Vorteil, dass ein Teil des ersten Fluidelements für unterschiedlichen Fluidtransport genutzt wird. Dies verringert die Kosten der Vorrichtung.A first fluid element is preferably connected to the Receptacle and the means to provide the Additional liquid connected. A second fluid element is with the first fluid element in the form of a branch and with the Storage container connected. It is thus possible to go through the first Feed additional element to the fluid container in the fluid container. For the second fluid element is in connection with the section of the first fluid element, which is between the receptacle and the branch is arranged, possible liquid from the Feed receptacle to the storage container. This has the Advantage that part of the first fluid element for different fluid transport is used. This diminishes the cost of the device.

Vorzugsweise ist an der Abzweigung eine Einrichtung zur Festlegung der Fluidverbindung vorgesehen. Diese Einrichtung ist, wie vorstehend beschrieben, steuerbar, so dass die Fluidverbindung automatisch oder durch einen entsprechenden Steuerbefehl festgelegt werden kann.A device for is preferably at the junction Determination of the fluid connection provided. This facility is as described above, controllable so that the Fluid connection automatically or by an appropriate Control command can be set.

Vorzugsweise weist die Einrichtung zur Festlegung der Fluidverbindung eine erste Schlauchklemme, die zwischen den Mitteln zur Bereitstellung der Zusatzlösung und der Abzweigung angeordnet ist, und eine zweite Schlauchklemme, die zwischen der Abzweigung und dem Lagerbehältnis angeordnet ist, auf. Bei geschlossener zweiter Schlauchklemme und geöffneter erster Schlauchklemme besteht somit eine Fluidverbindung zwischen den Mitteln zur Bereitstellung der Zusatzlösung und dem Aufnahmebehältnis. Wenn die erste Schlauchklemme geschlossen und die zweite Schlauchklemme geöffnet ist, besteht eine Fluidverbindung zwischen dem Aufnahmebehältnis und dem Lagerbehältnis.Preferably, the device for determining the Fluid connection a first hose clamp between the Means for providing the additional solution and the branch is arranged, and a second hose clamp between the Branch and the storage container is arranged on. at closed second hose clamp and opened first Hose clamp is thus a fluid connection between the Means for providing the additional solution and the Receptacle. When the first hose clamp is closed and the second hose clamp is open, there is one Fluid connection between the receptacle and the Storage container.

Zur weiteren Automatisierung sind die Schlauchklemmen vorzugsweise nicht manuell, sondern elektromagnetisch oder pneumatisch betätigbar. Die Schlauchklemmen können über eine entsprechende Steuereinrichtung betätigt werden.The hose clamps are for further automation preferably not manually, but electromagnetic or pneumatically operated. The hose clamps can be over a corresponding control device can be operated.

Bei einer bevorzugten Ausführungsform ist zwischen dem Zellbehältnis und der Abzweigung ein mit dem ersten Fluidelement verbundenes Fördermittel angeordnet. Die Anordnung des Fördermittels an dieser Stelle hat den Vorteil, dass in Zusammenwirkung mit der Einrichtung zur Festlegung der Fluidverbindung zur Fluidförderung im ersten und zweiten Fluidelement nur eine einzige Pumpe erforderlich ist. Bei dieser Ausführungsform ist die Überführung von Zusatzlösung in das Aufnahmebehältnis einerseits und nach der Mischung die Überführung von Zusatzlösung und Transplantat in das Lagerbehältnis andererseits mit nur einem Fördermittel, wie einer vorzugsweise volumetrischen Pumpe möglich, die in dem Leitungsabschnitt der ersten Schlauchleitung zwischen dem Aufnahmebehältnis und der Abzweigung des zweiten Fluidelements angeordnet ist. Zum Fördern der Zusatzlösung bzw. der Mischung wird die Förderrichtung der Pumpe jeweils umgekehrt. Dabei gewährleisten vorzugsweise Schlauchklemmen an der ersten oder zweiten Schlauchleitung, dass die Flüssigkeiten in die richtigen Richtungen fließen. Anstelle von Schlauchklemmen können auch Mehrwegventile oder dgl. vorgesehen sein. In a preferred embodiment, between the Cell container and the branch with the first fluid element connected funding arranged. The arrangement of the Funding at this point has the advantage that in Cooperation with the establishment of the Fluid connection for fluid delivery in the first and second Fluid element only a single pump is required. At this The embodiment is the transfer of additional solution into the Receptacle on the one hand and after mixing the Transfer of additional solution and graft into the Storage container on the other hand with only one funding, such as one preferably volumetric pump possible in the Line section of the first hose line between the Receptacle and the branch of the second fluid element is arranged. For conveying the additional solution or the mixture the pump delivery direction is reversed. there preferably ensure hose clamps on the first or second hose line that the fluids in the correct Directions flow. Instead of hose clamps, too Reusable valves or the like can be provided.

Der Einsatz einer volumetrischen Pumpe zum Fördern der Flüssigkeiten hat den Vorteil, dass sich das Volumen der Zusatzlösung auf einfache Weise aus der Anzahl der Umdrehungen der Pumpe bestimmen bzw. mit der Anzahl der Umdrehungen vorgeben lässt. Auch das Volumen der in das Lagerbehältnis abzufüllenden Mischung aus Transplantat und Zusatzlösung kann mit der volumetrischen Pumpe auf einfache Weise bestimmt bzw. vorgegeben werden.The use of a volumetric pump to pump the Liquids has the advantage that the volume of the Additional solution in a simple way from the number of revolutions determine the pump or specify the number of revolutions leaves. Also the volume of those to be filled into the storage container Mixture of graft and additional solution can be used with the volumetric pump easily determined or specified become.

Das Volumen des Transplantats wird von dem Zellseparator vorgegeben. Dieses kann in die Vorrichtung manuell eingegeben oder direkt aus dem Zellseparator ausgelesen werden. Die Bestimmung der Zellenzahl erfolgt vorzugsweise mittels einer Probe. Hierzu ist vorzugsweise ein mit dem Aufnahmebehältnis verbundenes Testbehältnis vorgesehen, in dem eine für die Probe ausreichende Menge an Stammzellenkonzentrat gesammelt wird. Das Testbehältnis ist vorzugsweise ein mit dem Aufnahmebehältnis verbundener Folienbeutel, der zur Entnahme der Probe abgeschweißt wird.The volume of the graft is determined by the cell separator specified. This can be entered into the device manually or can be read directly from the cell separator. The The number of cells is preferably determined using a Sample. For this purpose there is preferably one with the receptacle connected test container provided, in which one for the sample sufficient amount of stem cell concentrate is collected. The The test container is preferably one with the receiving container connected foil pouch, which is welded to take the sample becomes.

Die Zusatzlösung wird vorzugsweise in mehreren Behältnissen bereitgestellt, die jeweils eine Flüssigkeit aufnehmen, aus denen die Zusatzlösung gemischt wird. Die Zusatzlösung kann beispielsweise eine aus DMSO und HES und autologem Plasma gemischte Gefrierschutzlösung oder eine aus NaCl, RPMI, HA und ACD gemischte Waschlösung sein. Das autologe Plasma zur Mischung der Gefrierschutzlösung kann mit dem Zellseparator gewonnen und der Vorrichtung wie das Zellentransplantat kontinuierlich oder in Intervallen zugeführt werden.The additional solution is preferably in several containers provided that each absorb a liquid from which the additional solution is mixed. The additional solution can for example one made from DMSO and HES and autologous plasma mixed antifreeze solution or one of NaCl, RPMI, HA and ACD mixed wash solution. The autologous plasma for mixing the antifreeze solution can be obtained with the cell separator and the device like the cell graft continuously or in Intervals are supplied.

Die Behältnisse zur Aufnahme von DMSO, HES und/oder NaCl, RPMI, HA sowie ACD sind vorteilhafterweise mit den jeweiligen Flüssigkeiten gefüllte Folienbeutel, die zur Bemessung der Flüssigkeitsmengen Volumenangaben enthalten können. Anstelle von Folienbeuteln sind auch großvolumige Spritzen oder Glasbehältnisse denkbar, die manuell bedient oder in die bekannten Perfusoren eingelegt werden. Auch das Aufnahme- und Lagerbehältnis sind vorzugsweise Folienbeutel, die mit Schlauchleitungen als Fluidelemente miteinander verbunden sind. Damit können alle mit dem Transplantat in Verbindung kommenden Teile der Vorrichtung als ein nur zur einmaligen Verwendung bestimmtes Disposable bereitgestellt werden.The containers to hold DMSO, HES and / or NaCl, RPMI, HA and ACD are advantageously with the respective Liquid-filled foil bags that are used to dimension the Liquid quantities can contain volume information. Instead of Foil bags are also large volume syringes or Glass containers conceivable, operated manually or in the known perfusors are inserted. Also the recording and Storage containers are preferably foil bags that come with Hose lines are connected together as fluid elements. This allows everyone to come into contact with the graft Parts of the device as one for single use only certain disposable are provided.

In einer bevorzugten Ausführungsform der Vorrichtung ist eine Steuereinrichtung vorgesehen, die das Volumen an Zusatzlösung vorgibt. Das Mischungsverhältnis von Zellentransplantat und Zusatzlösung ist von der Zellenzahl und dem Volumen des Transplantats abhängig. Die Steuereinrichtung weist vorzugsweise eine Speichereinheit zum Speichern von Transplantatvolumen und Zellenzahl sowie eine Recheneinheit auf, die aus diesen beiden Größen, die zum Mischen mit dem Transplantat erforderliche Menge an Zusatzlösung bestimmt.In a preferred embodiment of the device is a Control device provided the volume of additional solution pretends. The mixing ratio of cell graft and Additional solution is based on the number of cells and the volume of the Transplant dependent. The control device preferably has a storage unit for storing graft volume and Cell count as well as an arithmetic unit based on these two Sizes, the amount required to mix with the graft determined on additional solution.

Nach dem Abfüllen des Transplantats mit der Zusatzlösung muss das Behältnis sorgfältig entlüftet werden, damit beim Auftauen plötzliche Volumenschwankungen das Behältnis nicht zum Platzen bringen. Daher weist das Lagerbehältnis vorzugsweise eine mit einem hydrophoben Bakterienfilter/Virenfilter verschlossene Entlüftungsöffnung auf. Wenn das Lagerbehältnis mit dem Bakterienfilter nach oben zeigend in einen Plasmaextraktor eingesetzt wird, lässt sich die Entlüftung problemlos durchführen.After filling the graft with the additional solution, this must be done The container must be carefully vented so that it can be thawed sudden volume fluctuations the container does not burst bring. Therefore, the storage container preferably has one a hydrophobic bacterial / viral filter Vent opening. If the storage container with the Bacteria filter pointing upwards in a plasma extractor venting can be used without any problems carry out.

Vorzugsweise ist zwischen der Entlüftungsöffnung und dem Lagerbehältnis ein mit Markierungen versehener Schlauch angeordnet. Die Markierungen dienen zum Abtrennen bestimmter Probenvolumina. Beispielsweise kann der Schlauch an den Markierungen verschweißt werden. Hierdurch ist eine automatische Probenentnahme möglich, durch die die Sterilität des Systems nicht beeinflusst wird.Is preferably between the vent and the Storage container a marked hose arranged. The markings are used to separate certain ones Sample volumes. For example, the hose to the Markings are welded. This is an automatic Sampling possible by the sterility of the system is not affected.

Da es sich bei der Mischung von Gefrierschutzlösung und Transplantat um eine exotherme Reaktion handelt, deren Wärmeentwicklung das Transplantat schädigen könnte, sind vorzugsweise Mittel zur Kühlung des Aufnahmebehältnisses vorgesehen. Zusätzlich können auch Mittel zum Kühlen der in das Aufnahmebehältnis zu überführenden Zusatzlösung vorgesehen sein, da auch die Mischung von z. B. DMSO und HES eine exotherme Reaktion darstellt. Die Kühlmittel für das Aufnahmebehältnis umfassen vorzugsweise eine das Behältnis in Bewegung versetzende Schwenkeinrichtung, um die Flüssigkeit gleichmäßig zu kühlen, wodurch gleichzeitig eine Durchmischung stattfindet.Since it is in the mixture of antifreeze solution and Graft is an exothermic reaction, the Heat buildup could damage the graft preferably means for cooling the receptacle intended. In addition, means for cooling the in the Receptacle to be transferred to the additional solution to be transferred, since the mixture of z. B. DMSO and HES an exothermic Represents reaction. The coolant for the receptacle preferably comprise one which sets the container in motion Swivel device to cool the liquid evenly, whereby mixing takes place at the same time.

Im folgenden werden zwei bevorzugte Ausführungsbeispiele der Erfindung unter Bezugnahme auf die Zeichnungen näher erläutert.The following are two preferred embodiments of the Invention explained with reference to the drawings.

Es zeigen:Show it:

Fig. 1 eine vereinfachte schematische Darstellung eines ersten Ausführungsbeispiels der Vorrichtung zur Vorbereitung von Stammzellen für die Kryokonservierung, Fig. 1 is a simplified schematic representation of a first embodiment of the apparatus for preparation of stem cells for cryopreservation,

Fig. 2 das Kühlmittel für das Aufnahmebehältnis der Vorrichtung von Fig. 1 in vereinfachter schematischer Darstellung, und Fig. 2 shows the coolant for the receptacle of the device of Fig. 1 in a simplified schematic representation, and

Fig. 3 ein zweites Ausführungsbeispiel der Vorrichtung. Fig. 3 shows a second embodiment of the device.

Die Vorrichtung zur Aufarbeitung peripherer Blutstammzellen für die Kryokonservierung umfasst verschiedene Komponenenten zur Steuerung des Verfahrensablaufs und ein als Disposable ausgebildetes Schlauchleitungsset mit Folienbeuteln.The device for processing peripheral blood stem cells for cryopreservation includes various components Control of the process flow and a disposable trained hose line set with plastic bags.

Das Schlauchleitungsset weist einen Folienbeutel 1 zur Aufnahme des Zellentransplantats auf. Das Aufnahmebehältnis 1 weist eine erste Öffnung 1a auf, an dem eine Schlauchleitung 2 angeschlossen ist, die mit dem Auslass 3a des Zellseparators 3 für das Stammzellenkonzentrat verbunden ist. Ein zweites Anschlussstück 1b des Aufnahmebehältnisses 1 ist über eine Schlauchleitung 4c mit einem kleineren Testbeutel 4 verbunden, der einen mit einer durchstechbaren Membran 4a verschlossenen Schlauchansatz 4b für die Probenentnahme aufweist. Ein drittes Anschlussstück 1c des Beutels 1 ist über eine Schlauchleitung 5 mit dem Anschlussstück 6c eines Folienbeutels 6 verbunden, der als Gefrierschutzlösung z. B. mit DMSO und/oder einem anderen Kryoprotekivum HES befüllt ist. DMSO ist in der Lage, in Zellen einzudringen und senkt die Temperatur ab, bei der es zu einer Eisbildung kommt. HES gehört zu den makromolekularen Kryoprotectiven.The hose line set has a film bag 1 for receiving the cell graft. The receptacle 1 has a first opening 1 a, to which a hose line 2 is connected, which is connected to the outlet 3 a of the cell separator 3 for the stem cell concentrate. A second connector 1 b of the receptacle 1 is c via a hose 4 with a smaller test bag 4 is connected, which has a sealed tube a neck 4 b having a pierceable membrane 4 for the sampling. A third connector 1 c of the bag 1 is connected via a hose 5 to the connector 6 c of a foil bag 6 , which as a freeze protection solution z. B. is filled with DMSO and / or another cryoprotectant HES. DMSO is able to penetrate cells and lowers the temperature at which ice forms. HES is one of the macromolecular cryoprotectives.

Ein Folienbeutel 7 für autologes Plasma weist ein Anschlussstück 7a auf, das über eine Schlauchleitung 8 mit der Schlauchleitung 5 verbunden ist. Der Plasmabeutel 7 wird über eine Schlauchleitung 9 befüllt, die zu dem Auslass 3b des Zellseparators 3 für das Plasma führt. Die Anschlussstücke 6c, 7a der beiden Beutel 6, 7 sind mit allgemein bekannten Abbrechteilen verschlossen. Zum Fördern des Plasmas ist eine volumetrische Rollenpumpe 10 an der Schlauchleitung 8 vorgesehen. Die beiden Beutel 6, 7 und die Pumpe 10 bilden die Mittel 11 zur Bereitstellung einer aus dem DMSO und HES sowie autologen Plasmas zu mischenden Zusatzlösung. A film bag 7 for autologous plasma has a connector 7 a, which is connected to the hose line 5 via a hose line 8 . The plasma bag 7 is filled via a hose line 9 , which leads to the outlet 3 b of the cell separator 3 for the plasma. The connecting pieces 6 c, 7 a of the two bags 6 , 7 are closed with generally known break-off parts. A volumetric roller pump 10 is provided on the hose line 8 for conveying the plasma. The two bags 6 , 7 and the pump 10 form the means 11 for providing an additional solution to be mixed from the DMSO and HES and autologous plasma.

Von der Schlauchleitung 5 zweigt eine Schlauchleitung 12 ab, die zu einem Dreiwege-Ventil 12c führt, von dem zwei Leitungszweige 12a, 12b abgehen, die mit jeweils einem Lagerbehältnis 13, 14 verbunden sind. Jedes Lagerbehältnis 13, 14 ist ein mit den Schlauchleitungszweigen 12a, 12b verschweißter Folienbeutel, der eine Entlüftungsöffnung 13a, 14a aufweist. An der Entlüftungsöffnung jedes Lagerbeutels ist ein Schlauchleitungsstück 13b, 14b angeschlossen, das mit einem hydrophoben Bakterienfilter 11c, 14c verschlossen ist, der für Luft durchlässig, aber für Flüssigkeiten undurchlässig ist. Damit Kontaminationen ausgeschlossen sind, muss der Filter eine hohe Dichtigkeit gegenüber Bakterien und Viren haben. Das Schlauchleitungsstück 13b, 14b enthält Markierungen, die die Gewinnung von Referenzproben bestimmter Volumina durch Abschweißen gewährleisten.From the hose line 5 branches off a hose line 12 , which leads to a three-way valve 12 c, from which two line branches 12 a, 12 b depart, which are each connected to a storage container 13 , 14 . Each storage container 13 , 14 is a foil bag welded to the hose line branches 12 a, 12 b and has a vent opening 13 a, 14 a. At the ventilation opening of each storage bag a hose line piece 13 b, 14 b is connected, which is closed with a hydrophobic bacterial filter 11 c, 14 c, which is permeable to air but impermeable to liquids. To prevent contamination, the filter must have a high level of tightness against bacteria and viruses. The hose line piece 13 b, 14 b contains markings which ensure the obtaining of reference samples of certain volumes by welding.

Zum Fördern von Zusatzlösung in das Aufnahmebehältnis 1 einerseits und der Mischung aus Zusatzlösung und Stammzellenkonzentrat andererseits in einen der beiden Lagerbeutel 13, 14 ist eine volumetrische Rollenpumpe 15 vorgesehen. An dem Leitungsabschnitt zwischen den Mitteln 11 zur Bereitstellung der Zusatzlösung und der Abzweigung der Schlauchleitung 12 ist eine erste Schlauchklemme 16 und an der zu den Lagerbeuteln 13, 14 führenden Schlauchleitung 12 eine zweite Schlauchklemme 17 vorgesehen. Die beiden Schlauchklemmen 16, 17 bilden zusammen mit der Abzweigung eine Einrichtung 160 zur Festlegung der Fluidverbindung. Ferner weist die Vorrichtung eine erste Kühleinrichtung 18 zum Kühlen der in dem Aufnahmebehältnis 1 befindlichen Suspension und eine zweite Kühleinrichtung 20 zum Kühlen der in das Aufnahmebehältnis 1 zu überführenden Zusatzlösung auf. A volumetric roller pump 15 is provided to convey additional solution into the receptacle 1 on the one hand and the mixture of additional solution and stem cell concentrate on the other hand into one of the two storage bags 13 , 14 . A first hose clamp 16 is provided on the line section between the means 11 for providing the additional solution and the branching of the hose line 12 , and a second hose clamp 17 is provided on the hose line 12 leading to the storage bags 13 , 14 . The two hose clamps 16 , 17 together with the branch form a device 160 for fixing the fluid connection. Furthermore, the device has a first cooling device 18 for cooling the suspension located in the receptacle 1 and a second cooling device 20 for cooling the additional solution to be transferred into the receptacle 1 .

Sämtliche Schlauchleitungen sind mit den Folienbeuteln fest verbunden, vorzugsweise verschweißt, so dass die Vorrichtung ein steriles in sich geschlossenes Schlauchset bildet. Ferner ist die Schlauchleitung 2, die den Zellseparator mit dem Aufnahmebehältnis verbindet, mit dem Aufnahmebehältnis 1 fest verbunden.All hose lines are firmly connected to the foil bags, preferably welded, so that the device forms a sterile, self-contained hose set. Furthermore, the hose line 2 , which connects the cell separator to the receptacle, is firmly connected to the receptacle 1 .

Erfindungsgemäß handelt es sich hierbei um ein in sich geschlossenes steriles System aus Fluidverbindungen und Aufnahmebehältnissen. Alternativ ist es auch möglich, das geschlossene sterile System aus Fluidverbindungen und Aufbewahrungsbehältern vor Ort herzustellen, indem die Fluidelemente und/oder Behältnisse unter sterilen Bedingungen miteinander verbunden werden.According to the invention, this is an inherent one closed sterile system of fluid connections and Receptacles. Alternatively, it is also possible that closed sterile system of fluid connections and Manufacture storage containers on site by the Fluid elements and / or containers under sterile conditions be connected to each other.

Fig. 2 zeigt eine vereinfachte schematische Darstellung der ersten Kühleinrichtung 18 für das Aufnahmebehältnis 1 in der Seitenansicht. Die Kühleinrichtung 18 weist eine Schwenkeinrichtung 19 mit einer pendelnd gelagerten Metallplatte 19a auf, die von einem nicht dargestellten Antrieb kontinuierlich geschwenkt wird. In der Platte 19a befinden sich nicht dargestellte Kühlmittelschleifen, die von Kühlmittel durchströmt werden. Das Aufnahmebehältnis 1 liegt flach auf der Kühlplatte auf und wird zur gleichmäßigen Kühlung der Flüssigkeit kontinuierlich bewegt. Hierdurch wird die Erwärmung von Zusatzlösung und Zelltransplantat, die durch die exotherme Reaktion hervorgerufen wird, verringert, so dass ein Beschädigen der Zellen vermieden wird. Die Bewegung des Aufnahmebehältnisses dient gleichzeitig der besseren Durchmischung von Zellentransplantat und Zusatzlösung. Neben der Schwenkbewegung kann daher auch eine Schüttel- oder Rotationsbewegung vorteilhaft sein. Fig. 2 shows a simplified schematic representation of the first cooling device 18 for the receptacle 1 in the side view. The cooling device 18 has a pivoting device 19 with an oscillating metal plate 19 a, which is pivoted continuously by a drive, not shown. In the plate 19 a there are coolant loops, not shown, through which coolant flows. The receptacle 1 lies flat on the cooling plate and is moved continuously for uniform cooling of the liquid. As a result, the heating of the additional solution and cell transplant, which is caused by the exothermic reaction, is reduced, so that damage to the cells is avoided. The movement of the receptacle also serves to improve the mixing of the cell graft and additional solution. In addition to the swiveling movement, a shaking or rotating movement can therefore also be advantageous.

Sämtliche Ventile 12c, 16, 17 der Vorrichtung sind elektromagnetisch betätigbar. Die Steuerung der Vorrichtung übernimmt eine Steuereinrichtung 21, die eine Recheneinheit 21a und eine Speichereinheit 21b sowie eine Eingabeeinheit 21c umfasst. Von der Steuereinrichtung 21 führen Steuerleitungen 13a, 16a, 17a zu den Ventilen 12c, 16, 17 und Steuerleitungen 10a, 15a zu den Pumpen 10, 15. Eine Datenleitung 22 verbindet den Datenausgang des Zellseparators 3 mit der Steuereinrichtung 21.All valves 12 c, 16 , 17 of the device can be actuated electromagnetically. The device is controlled by a control device 21 , which comprises a computing unit 21 a and a storage unit 21 b and an input unit 21 c. From the control device 21 control lines 13 a, 16 a, 17 a lead to the valves 12 c, 16 , 17 and control lines 10 a, 15 a to the pumps 10 , 15 . A data line 22 connects the data output of the cell separator 3 to the control device 21 .

Die Vorrichtung zur Aufarbeitung von Stammzellen arbeitet wir folgt:
Der Zellseparator 3 wird mit dem Apheresensystem bestückt, das mit den Schlauchleitungen 2 und 9 verbunden ist. Die Steuerleitung 22 ist an dem Zellseparator 3 angeschlossen. Anschließend wird der Zellseparator 3 in Betrieb gesetzt. Das Aufnahmebehältnis 1 füllt sich nun mit Transplantat, dessen Volumen von dem Zellseparator 3 bestimmt wird. Die Steuereinrichtung liest diesen Wert, der in der Speichereinheit 21b gespeichert wird.The device for processing stem cells works as follows:
The cell separator 3 is equipped with the apheresis system, which is connected to the hose lines 2 and 9 . The control line 22 is connected to the cell separator 3 . The cell separator 3 is then put into operation. The receptacle 1 is now filled with graft, the volume of which is determined by the cell separator 3 . The control device reads this value, which is stored in the storage unit 21 b.

Nach Beendigung der Stammzellenapherese und nach Durchmischung des Transplantats wird der Testbeutel 4 manuell gefüllt, um ein kleines Volumen mit repräsentativer Zellenzahl abzutrennen. Anschließend wird der Testbeutel 4 abgeschweißt, indem die Schlauchleitung 4c gleichzeitig durchtrennt und verschweißt wird. Entsprechende Werkzeuge hierfür gehören zum Stand der Technik. Alternativ kann die Leitung aber auch mit einer Schlauchklemme abgeklemmt werden. Dem Testbeutel 4 wird nun eine Probe zur Bestimmung der Anzahl der Zellen und der Anzahl der Stammzellen in dem Transplantat entnommen. Die Anzahl der Zellen und der Stammzellen wird in die Eingabeeinheit 21c der Steuereinrichtung 21 eingegeben und ebenfalls in der Speichereinheit 21b gespeichert. Aus dem Transplantatvolumen und der Anzahl der Zellen berechnet die Recheneinheit 21a der Steuereinrichtung 21 dann das Mischungsverhältnis von Zusatzlösung und Zellentransplantat.After the end of the stem cell apheresis and after the graft has been mixed, the test bag 4 is filled manually in order to separate a small volume with a representative number of cells. The test bag 4 is then welded off by simultaneously cutting and welding the hose line 4 c. Appropriate tools for this belong to the state of the art. Alternatively, the line can also be disconnected with a hose clamp. A sample is now taken from the test bag 4 to determine the number of cells and the number of stem cells in the graft. The number of cells and the stem cells is inputted to the input unit 21 c of the controller 21 and stored in the storage unit B also 21st From the transplant volume and the number of cells, the computing unit 21 a of the control device 21 then calculates the mixing ratio of additional solution and cell transplant.

Daraufhin werden die Abbrechteile der Anschlussstücke 6a, 7a der Beutel 6, 7 abgebrochen. Die Steuereinrichtung 21 setzt nun die volumetrische Rollenpumpe 15 in Gang, die Zusatzlösung wird aus den Beuteln 6, 7 über die Schlauchleitung 5 in das Aufnahmebehältnis 1 befördert. Die Zusatzlösung ist eine Mischung aus DMSO und HES sowie autologem Plasma. Es kann aber auch eine Gefrierschutzlösung ohne die Zugabe autologen Plasmas zugeführt werden, so dass der Plasmabeutel 7 entfallen kann. Zum Fördern des Plasmas setzt die Steuereinrichtung 21 gleichzeitig die Rollenpumpe 10 in Gang. Die Umdrehungen der Pumpen stellt die Steuereinrichtung in Abhängigkeit von dem berechneten Mischungsverhältnis ein. Die Zugabe der Zusatzlösung erfolgt zeitgesteuert mit einer Rate von vorzugsweise 10 ml/Min, da die Gefrierschutzlösung osmotisch aktiv ist und eine zu schnelle Infusion daher eine Zellschädigung zur Folge haben könnte. Während beide Pumpen 10, 15 in Betrieb sind, ist die erste Schlauchklemme 16 geöffnet und die zweite Schlauchklemme 17 geschlossen. Da bei dem Mischvorgang von DMSO und HES sowie autologen Plasmas Wärme entsteht, wird die zufließende Zusatzlösung mit der zweiten Kühleinrichtung 20 gekühlt. Die Mischung aus Transplantat und Zusatzlösung wird mit der ersten Kühleinrichtung 18 fortlaufend gekühlt, wobei gleichzeitig eine Durchmischung mittels der Schwenkeinrichtung 19 (Fig. 2) stattfindet.Then the break-off parts of the connecting pieces 6 a, 7 a of the bags 6 , 7 are broken off. The control device 21 now starts the volumetric roller pump 15 , the additional solution is conveyed from the bags 6 , 7 via the hose line 5 into the receptacle 1 . The additional solution is a mixture of DMSO and HES as well as autologous plasma. However, an anti-freeze solution can also be supplied without the addition of autologous plasma, so that the plasma bag 7 can be omitted. To convey the plasma, the control device 21 simultaneously starts the roller pump 10 . The control device adjusts the revolutions of the pumps as a function of the calculated mixing ratio. The addition of the additional solution is time-controlled at a rate of preferably 10 ml / min, since the anti-freeze solution is osmotically active and too rapid an infusion could therefore result in cell damage. While both pumps 10 , 15 are in operation, the first hose clamp 16 is open and the second hose clamp 17 is closed. Since heat is generated during the mixing process of DMSO and HES and autologous plasma, the additional solution flowing in is cooled with the second cooling device 20 . The mixture of graft and additional solution is continuously cooled with the first cooling device 18 , with mixing taking place at the same time by means of the swivel device 19 ( FIG. 2).

Anschließend hält die Steuereinrichtung 21 die Pumpen 10 und 15 an und kehrt die Förderrichtung der Pumpe 15 um, wobei die erste Schlauchklemme 16 geschlossen und die zweite Schlauchklemme 17 geöffnet wird. Die zu konservierende Mischung strömt nun über die Schlauchleitung 12 in den ersten Lagerbeutel 13. Nachdem der Beutel 13 gefüllt ist, schaltet die Steuereinrichtung 21 das Dreiwege-Ventil um, so dass der zweite Beutel 14 befüllt wird. Es können noch weitere Beutel vorgesehen sein, die nacheinander befüllt werden. Danach schaltet die Steuereinrichtung sämtliche Aggregate ab.The control device 21 then stops the pumps 10 and 15 and reverses the delivery direction of the pump 15 , the first hose clamp 16 being closed and the second hose clamp 17 being opened. The mixture to be preserved now flows into the first storage bag 13 via the hose line 12 . After the bag 13 is filled, the control device 21 switches the three-way valve so that the second bag 14 is filled. Additional bags can be provided which are filled one after the other. The control device then switches off all units.

Die Lagerbeutel werden nacheinander abgeschweißt, indem die Leitungsabschnitte 12a, 12b durchtrennt und verschweißt werden. Zur Entlüftung werden die Beutel in einen Plasmaextraktor so eingelegt, dass die Bakterienfilter nach oben zeigen. Für die mikrobiologische Diagnostik und die Transplantatanalyse können durch Abtrennen und Verschweißen der Schlauchleitungsstücke 13b, 14b der Beutel 13, 14 an dafür vorgesehenen Markierungen mehrere Proben entnommen werden. Zum Schluss werden die Beutel tiefgefroren.The storage bags are welded one after the other by cutting and welding the line sections 12 a, 12 b. For ventilation, the bags are placed in a plasma extractor so that the bacteria filter points upwards. For microbiological diagnostics and transplant analysis, several samples can be taken by separating and welding the hose line pieces 13 b, 14 b of the bags 13 , 14 at the markings provided for them. Finally, the bags are frozen.

Anstelle eines Aufnahmebehältnisses können auch mehrere über Schlauchleitungen miteinander verbundene Aufnahmebehältnisse vorgesehen sein. Dadurch ist insbesondere bei großvolumigen Apheresen ein Abzentrifugieren der Zellen und eine Verringerung des Volumens möglich. Wenn bei der Zentrifugation nicht auch die anderen Beutel mitzentrifugiert werden, müssen entsprechende Führungen für die Schlauchleitungen vorgesehen werden, die es ermöglichen, die anderen Beutel außerhalb der Zentrifuge zu lagern.Instead of one receptacle, several can be used Hose lines interconnected receptacles be provided. This is especially true for large volume Apheresis a centrifugation of the cells and a reduction of the volume possible. If not the same during centrifugation other bags must be centrifuged accordingly Guides are provided for the hose assemblies that it allow the other bags outside the centrifuge too to store.

Fig. 3 zeigt ein zweites Ausführungsbeispiel der Vorrichtung zur Aufarbeitung von Stammzellen, die sich von der unter Bezugnahme auf die Fig. 1 und 2 beschriebenen Ausführungsform nur durch die Mittel 11' zur Bereitstellung von Zusatzlösung unterscheide. FIG. 3 shows a second exemplary embodiment of the device for processing stem cells, which differs from the embodiment described with reference to FIGS. 1 and 2 only by the means 11 ′ for providing additional solution.

In Fig. 3 ist daher nur der variierende Bereich der Vorrichtung, d. h., das Mittel 11' dargestellt.In Fig. 3, therefore, only the varying area of the device, that is, the means 11 'is shown.

Die Mittel 11' zur Bereitstellung von Zusatzlösung umfassen bei dieser Ausführungsform vier weitere Folienbeutel 23 bis 26, die mit NaCl, RPMI-Medium, HA und ACD zur Herstellung einer Waschlösung gefüllt sind. NaCl als elektrolythaltige Trägerlösung kann zur Verdünnung der Lösungen oder zum Erreichen bestimmter Endkonzentrationen von z. B. Proteinlösungen eingesetzt werden. RPMI ist eine elektrolyt- und kohlenhydrathaltige Lösung mit balanciertem pH-Wert und Zusatz von Aminosäuren/Proteinen. Humanalbumin (HA) kann das autologene Plasma ersetzen. Durch die Zugabe von Natriumzitrat (ACD) oder Heparin wird eine Gerinnung des Zellentransplantats und die Bildung von Koageln verhindert.In this embodiment, the means 11 ′ for providing additional solution comprise four further foil bags 23 to 26 , which are filled with NaCl, RPMI medium, HA and ACD for producing a washing solution. NaCl as an electrolyte-containing carrier solution can be used to dilute the solutions or to reach certain final concentrations of e.g. B. protein solutions can be used. RPMI is an electrolyte and carbohydrate-containing solution with a balanced pH value and the addition of amino acids / proteins. Human albumin (HA) can replace autologous plasma. The addition of sodium citrate (ACD) or heparin prevents the cell graft from clotting and the formation of coagulum.

Die Folienbeutel sind über Schlauchleitungen 27 bis 31 mit der zu dem Aufnahmebehältnis 1 führenden Schlauchleitung 5 verbunden. Zum Fördern der Reagenzien sind Pumpen 32 bis 35 vorgesehen, die von der Steuereinrichtung 21 entsprechend angesteuert werden.The film bags are connected via hose lines 27 to 31 to the hose line 5 leading to the receptacle 1 . Pumps 32 to 35 are provided for conveying the reagents and are controlled accordingly by the control device 21 .

Die Steuereinrichtung 21 steuert die Pumpen derart an, dass zunächst eine Waschlösung hergestellt und als erste Zusatzlösung in das Aufnahmebehältnis 1 gefördert wird. Anschließend wird als zweite Zusatzlösung die Gefrierschutzlösung hergestellt und in den Beutel 1 gefördert. Die Mischung aus Stammzellenkonzentrat, Gefrierschutz- und Waschlösung wird dann in die einzelnen Lagerbeutel überführt. Das Mischungsverhältnis der beiden Zusatzlösungen und des Stammzellenkonzentrats wird wieder von der Steuereinrichtung berechnet und über die Umdrehungen der volumetrischen Pumpen eingestellt. Durch Vorgabe der Volumina der einzelnen Lösungen kann die Steuereinrichtung eine bestimmte Zellenzahl in jedem Lagerbeutel einstellen und die Konzentrate auf die Lagerbeutel verteilen.The control device 21 controls the pumps in such a way that a washing solution is first prepared and conveyed into the receptacle 1 as the first additional solution. The anti-freeze solution is then prepared as a second additional solution and conveyed into the bag 1 . The mixture of stem cell concentrate, anti-freeze and wash solution is then transferred to the individual storage bags. The mixing ratio of the two additional solutions and the stem cell concentrate is again calculated by the control device and set via the revolutions of the volumetric pumps. By specifying the volumes of the individual solutions, the control device can set a certain number of cells in each storage bag and distribute the concentrates over the storage bags.

Claims

1. Device for the preparation of cells, in particular stem cells for cryopreservation, with
a receiving container ( 1 ) for receiving cell transplant,
Means ( 11 , 11 ') for providing at least one additional solution to be mixed with the cell transplant,
at least one storage container ( 13 , 14 ) for holding the mixture of cell transplant and additional solution to be preserved and
Fluid elements ( 5 , 12 , 12 a, 12 b) for the liquid connection between the receiving container ( 1 ), the means ( 11 , 11 ') for providing additional solution and the storage container ( 13 , 14 ), so that a self-contained sterile, system that can be connected to a cell separator is formed.

2. Device according to claim 1, characterized in that a first fluid element ( 5 ) with the receptacle ( 1 ) and the means ( 11 , 11 ') for providing additional solution is connected and a second fluid element ( 12 ) with the first fluid element ( 5 ) in the form of a branch and connected to the storage container ( 13 , 14 ).

3. Device according to claim 2, characterized in that a device ( 160 ) for fixing the fluid connection is provided on the branch, which is controllable such that either a fluid connection between the means ( 11 , 11 ') for providing additional solution and Cell container ( 1 ) or a fluid connection between the cell container ( 1 ) and the storage container ( 13 , 14 ).

4. The device according to claim 3, characterized in that the device ( 160 ) for fixing the fluid connection a first hose clamp ( 16 ) which is arranged between the means ( 11 , 11 ') for providing the additional solution and the branch, and a second Hose clamp ( 17 ), which is arranged between the branch and the storage container ( 13 , 14 ).

5. The device according to claim 4, characterized in that the hose clamps are electromagnetically or pneumatically operable hose clamps ( 16 , 17 ).

6. Device according to one of claims 1-5, characterized in that a conveying means ( 15 ) connected to the first fluid element ( 5 ) is arranged between the cell container ( 1 ) and the branch.

7. The device according to claim 6, characterized in that the conveying direction of the conveying means ( 15 ) is reversible, so that both liquid into the cell container ( 1 ) and from the cell container ( 1 ) can be conveyed by the conveying means ( 15 ).

8. The device according to claim 6 or 7, characterized in that the conveying means ( 15 ) is a volumetric pump.

9. Device according to one of claims 1-8, characterized in that at least two storage containers ( 13 , 14 ) are provided.

10. The device according to any one of claims 1-9, characterized in that the fluid elements as hose lines ( 5 , 12 ) and / or the containers as foil bags ( 6 , 7 , 13 , 14 ) connected to the fluid elements ( 5 , 12 ) are.

11. The device according to any one of claims 1-10, characterized in that the means ( 11 , 11 ') for providing the additional solution comprise a plurality of containers ( 6 , 7 , 23-26 ) each for holding a liquid from which the additional solution is mixed becomes.

12. The device according to claim 11, characterized in that the containers are filled with the respective liquids, foil bags ( 6 , 7 , 23-26 ) and / or glass containers.

13. The apparatus of claim 11 or 12, characterized in that the containers ( 6 , 7 , 23-26 ) each have a pump ( 10 , 27-30 ) assigned.

14. Device according to one of claims 1-13, characterized in that a test container ( 4 ) for receiving cell transplant is connected to the cell container ( 1 ).

15. The device according to any one of claims 1-14, characterized in that a control device ( 21 ) is provided which controls the conveying means ( 15 ) and is designed such that a predetermined volume of additional solution can be transferred into the cell container ( 1 ).

16. The apparatus according to claim 15, characterized in that the control device (21) (21 b) for storing of the volume and the number of cells of the cell transplant and control means, having a memory unit (21 b) which is formed such that from the graft volume and the number of cells, the amount of additional solution required for mixing with the cell transplant can be determined.

17. The apparatus of claim 15 or 16, characterized in that the control device ( 21 ) is connected to the device ( 160 ) for fixing the fluid connection.

18. The apparatus according to claim 17, characterized in that the control device ( 21 ) in a first cycle after opening the first and closing the second hose clamp ( 16 , 17 ), the conveying means ( 15 ) for conveying additional solution into the cell container ( 1 ) and in a second cycle after closing the first and opening the second hose clamp and reversing the conveying direction of the conveying means ( 15 ) for conveying the mixture of cell concentrate and additional solution into the storage container ( 13 , 14 ).

19. The apparatus according to claim 18, characterized in that the storage container ( 13 , 14 ) with a small-pore filter ( 13 c, 14 c) for preventing bacterial / viral contamination, preferably a hydrophobic bacterial filter ( 13 c, 14 c) closed Has vent ( 13 a, 14 a).

20. The apparatus according to claim 19, characterized in that between the vent opening ( 13 a, 14 a) and the storage container ( 13 , 14 ) is provided with a hose provided with markings for separating samples.

21. The apparatus according to claim 20, characterized in that means for cooling the cell container ( 1 ) are provided.

22. The apparatus according to claim 21, characterized in that the coolant ( 18 ) for the cell container ( 1 ) has a movement device ( 19 ) which sets the cell container ( 1 ) in motion.

23. Device according to one of claims 1-22, characterized in that means ( 20 ) for cooling the additional solution to be transferred into the cell container ( 1 ) are provided.

24. Device according to one of claims 1-23, characterized in that sterile connections between fluid elements ( 5 , 12 , 12 a, 12 b) and / or containers ( 1 , 13 , 14 ) are made on site.

25. Use of the device according to one of claims 1-24 for Preparation of cells, especially stem cells for the Cryopreservation.