No dia 03 de abril de 2000, Jô Soares deu o primeiro “boa noite” do 'Programa do Jô'. O apresentador abriu a atração se dizendo feliz de estar de voltar à TV Globo e em seu monólogo de estreia, brincou com o padrão de qualidade da emissora. Enquanto ele falava, o microfone quebrava e o técnico, interpretado pelo ator Francisco Milani, acabava o atrapalhando.
Os entrevistados do primeiro programa foram o ator Tarcísio Meira, Dida, então goleiro da Seleção Brasileira, e a cantora Marisa Monte acompanhada da Velha Guarda da Portela. Jô Soares, que era amigo pessoal de Roberto Marinho, exibiu uma entrevista especial com o jornalista, gravada dias antes nos jardins da sua residência. Em entrevista ao Memória Globo, Jô Soares destacou a conversa com o empresário fundador da Rede Globo:
Estreia do 'Programa do Jô' (03/04/2000)
O musical de encerramento foi feito pelos sambistas da Velha Guarda da Portela e Marisa Monte. Eles cantaram 'Volta Meu Amor'.
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